土壤硝態(tài)氮試劑盒-國(guó)標(biāo)法,微板法
土壤硝態(tài)氮試劑盒-國(guó)標(biāo)法,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤硝態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS9130W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 硝態(tài)氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機(jī)物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)?硝態(tài)氮。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關(guān)系到作物的產(chǎn) 量與品質(zhì)。 土壤浸出液中硝酸根離子在 220nm 有明顯光吸收而在 275nm 波長(zhǎng)處沒(méi)有吸收峰，通 過(guò)測(cè)定土壤浸出液在 275nm 處的吸光度，乘以一個(gè)校正因素 f 以消除有機(jī)質(zhì)在 220nm 波 長(zhǎng)處的光吸收干擾。進(jìn)而得到土壤中硝態(tài)氮的含量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 試劑名稱保存要求 備注 試劑一 粉劑 g×1 瓶 4℃保存 臨用前先加 50mL 的蒸餾水，全部 轉(zhuǎn)移到量筒（自備）中，再加蒸餾 水定容至 600mL。 標(biāo)準(zhǔn)品 液體×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔 UV 板（用于紫外光波長(zhǎng)下的測(cè)定）、蒸餾水、天平、常溫離心機(jī)、量筒、 振蕩培養(yǎng)箱。 四、土壤硝態(tài)氮的測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理 取約 1g 新鮮土樣，若鮮土呈松散狀，盡可能過(guò) 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】： 1、土壤經(jīng)風(fēng)干或烘干易引起 NO3－ -N 變化，故一般都用新鮮土樣測(cè)定。 2、硝酸根為陰離子，不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很易在土壤內(nèi)部移動(dòng)，在土壤剖面上 下層移動(dòng)頻繁，因此測(cè)定硝態(tài)氮時(shí)注意采樣深度。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上。 ② 在 5mLEP 管中加入： 測(cè)定管 空白管（僅做一次） 鮮土（g） 1 試劑一（mL） 5 5 25℃，220rpm/min 往復(fù)式振蕩培養(yǎng) 1h， 混勻（成渾濁液狀態(tài)）用慢速定性濾紙過(guò)濾，澄清的濾液待測(cè)。 取 200μL 濾液至 96 孔板中，220nm 分別讀吸光值 A1、A2，再于 275nm 分別讀吸光值 A3、A4； A 測(cè)定管=A1-(A3×f)，A 空白管=A2-(A4×f) △A=A 測(cè)定管-A 空白管 注：f 為矯正因素 2.23。 【注】若測(cè)定管于 220nm 的 A 值大于 1，需用試劑一稀釋濾液使 A220nm 的值在 1 以內(nèi)， 稀釋倍數(shù) D 需代入公式計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.1305x - 0.0017；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值△A。 2、土壤硝態(tài)氮(NO3 --N)含量(mg/kg 鮮土)=(△A+0.0017)÷0.1305×V÷W×D =38.32×(△A+0.0017)÷W×D V---反應(yīng)總體積，5mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---實(shí)際稱取鮮土質(zhì)量，g。 【注】：*低檢出限為 0.5μg/g。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（100μg/mL）。 2 用試劑一把母液稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 1, 2, 3, 4, 5. μg/mL。也可根據(jù)實(shí) 際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 直接取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 200μL 至 96 孔板中，分別于 220nm 和 275nm 讀吸光值 A1、 A2，A 標(biāo)準(zhǔn)品=A1-(A2×f)。根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2
