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上海銳谷生物科技有限公司作者
《一》制備高特異性和價的熒光抗體
標本只有在用熒光探針標記的前提下才能進行共聚焦顯微鏡檢測．制備高特異性和價的熒光抗體是檢測的關鍵。這就要求選用高質量的熒光素和高特異性與價的免疫血清。同時還要對熒光抗體進行質量鑒定，主要是進行特異性和敏感性鑒定。
《二》標本制作要求
1．標本厚度 組織切片或其他標本不能太厚，否則激發(fā)光多數消耗在標本下部，而物鏡觀察的上部不能被充分激發(fā)。
2．載玻片 載玻片要光潔，無自發(fā)熒光；載玻片厚度應在0．8～1．2mm之間，太厚會吸收較多的光，不能使激發(fā)光在標本上聚焦。
3．封固劑 甘油必須無色透明，無自發(fā)熒光。由于熒光在pH 8．5～9．5時較亮，不易很快退去，常用甘油加入0．5mol／lpH 9．0～9．5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液封片。
《三》定量研究的要求
1．隨機性
（1）在感興趣區(qū)域內隨機抽樣，不能主觀地選擇一些便于定量的“理想切片”，這種“理想切片”不能代表所要研究的整體區(qū)域。
（2）在隨機抽取的切片上，應隨機抽取觀察視野。
（3）在隨機抽取的視野中，通過連續(xù)觀察“光學切片”，得到感興趣結構的三維定量信息。如果不能連續(xù)觀察“光學切片”，需要在Z軸方向隨機抽樣，然后作定量研究。
2．避免參照陷阱 如果獲得的資料是密度信息，當比較各組參照空間（包含待測結構的區(qū)域）的體積不同時，根據密度信息可能得出錯誤結論。因此，需要注意所謂的參照空間“陷阱”問題。
關鍵詞：共聚焦顯微鏡
下一篇：三維圖像與三維結構之間的關系
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