流動相：

1、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；

2、水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質；

3、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。

樣品：

1、采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；

2、用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相小）的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動相制備樣品液；手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的3～5倍。

色譜柱：

1、使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；

2、使用符合要求的流動相；

3、使用保護柱；

4、 如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗；

5、 色譜柱在不使用時，應用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；

6、 不要高壓沖洗柱子；

7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱。

液相色譜儀操作過程

1、開機操作：

① 打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機，打開Bootp Server（一般啟動時已打開）；

② 自上而下打開個組件電源，Bootp Server里顯示有信號時（有六行字符），打開工作站（先打開On line）；

③ 打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的小流量為準；

④ 注意各流動相所剩溶液的容積設定，若設定的容積低于低限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液；

⑤ 使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時正確處理各種突發(fā)事件。

2、 先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間（如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相），正式進樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；

3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結果；

4、 使用手動進樣器進樣時，在進樣前和進樣后都需用洗針液洗凈進樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；

5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；

6、 實驗結束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關閉D燈、W燈；

7、 關機時，先關閉泵、檢測器等，再關閉工作站，然后關機，后自下而上關閉色譜儀各組件，關閉洗泵溶液的開關；

8、 使用者須認真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時向老師報告，不要擅自拆卸儀器。

附常見故障排除方法

1、操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當出現(xiàn)錯誤警告（各組件指示燈均為紅色），一般為漏液，其中一個感應器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點擊操作界面中的Instrument/System On即可；

2、連接柱子與管線時，應注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結構有差異，hao不要混用，必要時可使用PEEK管及活動接頭；

3、操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法（新柱不提倡），若還是無法通暢，則需換柱；

4、運行過程中自動停泵，可能為壓力超過上限或流動相用完；

5、樣品瓶中樣品較少，自動進樣器進樣針無法到達液面，可采用調低進樣針進樣高度的辦法，注意設置時不要使進樣針碰到瓶底，微量樣品分析應使用微量樣品瓶；

6、自動進樣器進樣針未與樣品瓶瓶口對準時，需重新定位；

7、泵壓不穩(wěn)或流量不準，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換；

8、基線產生不規(guī)則噪聲，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達到化學平衡（使其平衡，若用離子對試劑，在使用使需要足夠的時間和溶劑體積，色譜柱才能達到足夠的平衡），流動相被污染（更換流動相，清洗儲液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng)），色譜柱被污染（為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱），檢測器不穩(wěn)定；

9、短期有規(guī)則的噪聲，可能原因為泵壓不穩(wěn)或泵脈沖，調節(jié)溶劑不適當（如兩種溶劑的互溶性問題），泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定；

10、長期有規(guī)則噪聲，可能原因為室溫不穩(wěn)（未使用柱溫箱）或使用柱溫箱不當；

11、基線漂移，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達到化學平衡，室溫不穩(wěn)（未使用柱溫箱），流動相污染或分解，柱污染，檢測池泄漏，系統(tǒng)泄漏，固定相流失（另選流動相，另選色譜柱），測定的波長選擇錯誤（對溶劑有吸收），樣品組分保留太長（用強度合適的溶劑清洗色譜柱），檢測器不穩(wěn)定；

12、每次進樣時的保留時間不重復，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或未達到化學平衡，由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定，進樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞，溶劑配比不合適，柱被污染；

13、無峰，可能原因為檢測器選擇錯誤，使用錯誤的流動相，樣品降解；

14、色譜峰比預計的小，可能原因為進樣體積錯誤，檢測器燈故障，進樣問題（瓶號錯、進樣體積不合適、進樣錯誤、針頭堵塞）；

15、峰變寬，可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高，過濾器、保護柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞，檢測器時間常數(shù)設置錯誤，進樣器問題（如閥漏、針頭堵塞或損壞），柱或保護柱被污染，對流動相來說樣品溶劑太強，使用錯誤的色譜柱，溫度變化；

16、出現(xiàn)雙峰/肩峰，可能原因為保護柱或柱入口部分阻塞，柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效，進樣體積太大或樣品濃度太高（樣品過載），平衡破壞；

17、前沿峰，可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高（樣品過載），平衡破壞，對于流動相來說樣品溶劑非極性太強（對于反相柱），柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效；

18、脫尾峰，可能原因為柱或保護柱被污染，柱性能下降，保護柱失效，進樣器問題（如閥漏等），檢測器時間常數(shù)設置錯誤；

19、出現(xiàn)鬼峰，可能原因為流動相被污染，樣品預處理時產生降解或混入雜質，先前進樣的流出物，樣品定量管清洗不當，注射器臟，柱被污染，進樣裝置被污染，流動相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。

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