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技�(shù)中心

牛彈性蛋白酶(Elastase)酶�(lián)免疫分析 ELISA試劑�

2011�03�03� 16:19:54人氣�429來源�上海卡努生物科技有限公司

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�(guān) � �牛彈性蛋白酶(Elastase)酶�(lián)免疫分析,上海卡努生物,ELISA試劑� ,48T/96T
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【資料簡介�

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測定牛血清,血漿及相關(guān)液體樣本�彈性蛋白酶�Elastase的含量�

�(shí)�(yàn)原理�

   本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛彈性蛋白酶�Elastase)水平。用純化的牛彈性蛋白酶�Elastase)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入彈性蛋白酶�Elastase),再與HRP�(biāo)記的彈性蛋白酶�Elastase抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�彈性蛋白酶�Elastase呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測定吸光度�OD值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中牛彈性蛋白酶�Elastase)濃度�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1

1

 

封板�

2片(48

2片(96

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8保存

�(biāo)�(zhǔn)品:54U/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止�

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌�

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�

4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢測分泌性的成份�(shí),用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱取重量。加入一定量�PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩�?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量�PBSPH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�

6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20保存,但�(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的�HRP)活性�

 

操作步驟�

1.         �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10孔,�*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為36 U/L,24 U/L ,12 U/L,6 U/L, 3 U/L)�

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)�待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶�(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�

3.         溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘�

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用�

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�

6.         加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度�OD值)� 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

 

注意事項(xiàng)�

1�  試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2�  濃洗滌液可能�(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�

3�  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其�(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣�

4�  請每次測定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣�OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)�n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�

5�  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6�  底物請避光保存�

7�  �(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8�  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�

9�  本試劑不同批�(hào)組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

 

�(jì)算:

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)�OD值為縱坐�(biāo)�   

在坐�(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品�OD     

值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀�      

倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度�OD值計(jì)算出�(biāo)      

�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品�OD      

代入方程式,�(jì)算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃度�                  

 

                                              

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.95以上�

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%11%

 

 

檢測范圍�                                             

1 U/L -45 U/L

                                       

                           

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期�6�(gè)�

上海卡努生物科技有限公司作�

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