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技�(shù)中心

�*釋放凋亡酶聯(lián)免疫分析

2017�10�10� 09:35:50人氣�256來源�上海酶聯(lián)生物研究所

資料類型doc文件資料大小110592
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� � �上海酶聯(lián)生物研究所 需要積�0
�(guān) � ��*釋放凋亡酶聯(lián)免疫分析
【資料簡介�

              �*釋放凋亡酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用�
檢測范圍�                                                          96T
1pg/ml-40pg/ml使用目的�
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本�*釋放凋亡含量�
實驗原理
本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中�*釋放凋亡水平。用純化的人*釋放凋亡抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入*釋放凋亡,再與HRP�(biāo)記的*釋放凋亡抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下�(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�*釋放凋亡呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線計算樣品中人*釋放凋亡濃度� 
試劑盒組� 

�(biāo)本要� 
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后�(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟
1.�(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
6.加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外� 
7.溫育:操作同3�
8.洗滌:操作同5�
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�10分鐘.
10.終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此時藍色立�(zhuǎn)黃色)�
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行�
操作程序總結(jié)�


計算
  以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度� 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響�(jié)果�
3.各步加樣均�(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其�(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�
4.請每次測定的同時做�(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
6.底物請避光保存�
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
保存條件及有效期
1.試劑盒保存�2-8℃�
2.有效期�6個月

上海酶聯(lián)生物研究所作�

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