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技術中�

小鼠嗜鉻蛋白A(CgA)定量檢� ELISA試劑�

2011�03�08� 16:19:58人氣�392來源��??ㄅ锟萍加邢薰?/span>

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� � �小鼠嗜鉻蛋白A(CgA)定量檢測試劑盒(ELISA�,上海卡努生物,ELISA試劑� ,48T/96
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【資料簡介�

使用說明�

                                                      

【試劑盒名稱�

小鼠嗜鉻蛋白ACgA)定�檢測試劑盒(ELISA

【試劑盒用�

定量檢測小鼠血�、血漿及相關液體樣本�嗜鉻蛋白ACgA含量�

【檢�原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法�ELISA)。將標準�、待測樣本加入到預先包被小鼠嗜鉻蛋白ACgA單克隆抗體透明酶標包被板中�溫育足夠時間�,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底�A�B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色�顏色的深淺與樣品�小鼠嗜鉻蛋白ACgA濃度呈正相關�450nm波長下測�OD�,根據標準品和樣品的OD�,計算樣本中小鼠嗜鉻蛋白ACgA含量�

【試劑盒組成

1

酶標包被�

12×8

7

顯色�A

6mL

2

標準�:  480pg/L

0.3mL×6

8

顯色�B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止�

6mL

4

*

6mL

10

說明�

1

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板�

2

6

酶標試劑

6mL

12

密封�

1

備注�標準品(16號)濃度依次為:480240�1206030�15pg/L

 

需要而未提供的試劑和器材

137恒溫�

2�標準規格酶標儀

3�精密移液器及一次性吸�

4�蒸餾�

5�一次性試�

6�吸水�

【操作步驟�

1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平�30分鐘�

2、配液:用蒸餾水�20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液�

3、加標準品和待測樣本:取足夠數量�酶標包被�,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準�50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再�*40μL(即樣本稀�5倍);空白對照孔不加�

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min�

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍�,每孔加滿洗滌液,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍�,如此重復洗�4次(也可用洗板機按說明書操作洗板��

6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作�50μL,空白對照孔不加�

7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min�

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍�,每孔加滿洗滌液,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍�,如此重復洗�4次(也可用洗板機按說明書操作洗板��

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色�B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯�15min�

10、終止:取出酶標�,每孔加終止�50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)�

11、測定:以空白孔調零,在終止�15分鐘�,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)�

12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本�OD�,在回歸方程上計算出對應的樣品濃�,也可以使用各種應用軟件來計�。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數�

【樣本要求�

1、樣�不能含疊氮鈉(NaN3,因�疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制��

2�標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放�-20℃保�,但應避免反復凍��

3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆��

【注意事項�

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為��

2酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存�

3、建議所有的標準�、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均�,以減小實驗誤差�

4、牢記樣本已經稀�5�,計算結果乘�5才是樣本實際濃度�

5、本試劑盒定量范圍為15-480pg/L ,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所�,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果�15-480pg/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度�

6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間�

7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸��酶標工作��*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微�;不得重復使�封板��

8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用�

9、底�B對光敏感,避免長時間暴露于光下�

 

 

【操作程序總結�

 

準備試劑,樣品和標準�

 


 

加入準備好的樣品和標準品�37℃反�30分鐘

 

洗板4�,加入酶標試劑,37℃反�30分鐘

 

洗板4次,加入顯色�A�B37℃顯�15分鐘

 

加入終止�

 

15分鐘之內讀OD

 

計算

 

檢測范圍

15-480pg/L

【規格�

96T/

【貯藏�

2-8℃,避光防潮保存�

【有效期�

6個月

�??ㄅ锟萍加邢薰?span>作�

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