上海一研生物科技有限公司作�
大鼠受體2B(GluR2B)ELISA檢測試劑盒技術參�
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� � � | 上海一研生物科技有限公司 | 需要積� | 0 |
� � � | 大鼠受體2B,GluR2B,elisa試劑� |
- 【資料簡介�
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA�。往預先包被大鼠受體2B(GluR2B)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍�,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠受�2B(GluR2B)呈正相�。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃��
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試�,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后�3000轉離�10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000轉離�30分鐘取上��
3. 細胞上清液:3000轉離�10分鐘去除顆粒和聚合物�
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000轉離�10分鐘取上��
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢�,請按一次用量分裝,凍存�-20�,避免反復凍�,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解��
自備物品
酶標儀�450nm�
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項試劑盒保存在2-8�,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結�*溶解后再使用�
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存�
標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀�,直接取10μL加樣即可�
嚴格按照說明書中標明的時�、加液量及順序進行溫育操作�
所有液體組分使用前充分搖勻�
試劑盒組�名稱
96孔配�
48孔配�
備注
微孔酶標�
12�×8�
12�×4�
�
標準品(80ug/mL�
0.6mL
0.6mL
按說明書進行稀�
標準品稀釋液
6mL
3mL
�
樣本稀釋液
6mL
3mL
�
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
�
20×洗滌緩沖�
25mL
15mL
大鼠受體2B(GluR2B)ELISA檢測試劑�按說明書進行稀�
底物A
6mL
3mL
�
底物B
6mL
3mL
�
終止�
6mL
3mL
�
封板�
2�
2�
�
說明�
1�
1�
�
自封�
1�
1�
�
注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為�80�40�20�10�5�2.5 ug/mL
試劑的準�
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀�,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾��
洗板方法
手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌�,靜�1min后甩盡孔內液�,在吸水紙上拍干,如此洗�5��
自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸�1min,洗�5��
操作步驟從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4��
設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準�50μL�
待測樣本孔先加待測樣�10μL,再加樣本稀釋液40μL�
隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
棄去液體,吸水紙上拍�,每孔加滿洗滌液,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍�,如此重復洗�5次(也可用洗板機洗板)�
每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
每孔加入終止�50μL�15min內,�450nm波長處測定各孔的OD��
結果判斷繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐�,繪制出標準品線性回歸曲�,按曲線方程計算各樣本濃度��
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900�
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小�1.0 ug/mL�
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%�
5. 貯藏�2-8℃,避光防潮保存�
6. 大鼠受體2B(GluR2B)ELISA檢測試劑�有效期:6個月
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