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技�(shù)中心

�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1ELISA試劑盒實(shí)�(yàn)原理

2019�01�31� 15:29:05人氣�190�(lái)源:上海一研生物科技有限公司

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�(guān) � ��11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)ELISA試劑�,HSD11β1,ELISA試劑�
【資料簡(jiǎn)介�

�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)ELISA試劑��(shí)�(yàn)原理�

  本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)水平。用純化的人11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)抗體包被微孔�,制成固相抗�,往包被單抗的微孔中加入11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1),再與HRP�(biāo)記的11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)抗體�(jié)�,形成抗�-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)�,并在酸的作用下�(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)的含��

試劑盒組成:

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

�(shuō)明書(shū)

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品:18 ng/ml

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)ELISA試劑�樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用�(wú)菌管收集,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)��

4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用�(wú)菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100�(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱(chēng)取重�。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)�?�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4�,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充�。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備��

6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根�(guò)氧化物酶的(HRP)活��

�11-β-羥基�(lèi)固醇脫氫�1(HSD11β1)ELISA試劑�操作步驟

�(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10�,在*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混�;然后從*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四�,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混�;然后在第三孔和第四孔中先各�50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混�;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第�、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔�,再在第九第十孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為12ng/ml, 8 ng/ml�4 ng/ml�2 ng/ml�1 ng/ml��
加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待�(cè)樣品�。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
溫育:操作同3�
洗滌:操作同5�
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�15分鐘.
終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
�(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘�?xún)?nèi)�(jìn)��
注意事項(xiàng)�

試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
濃洗滌液可能�(huì)有結(jié)晶析�,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助�,洗滌時(shí)不影響結(jié)��
各步加樣均應(yīng)使用加樣�,并�(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確�,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣�
�(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)�。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量�(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再�(cè)定,�(jì)算時(shí)�(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污��
底物�(qǐng)避光保存�
�(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理�
本試劑不同批�(hào)組分不得混用�
10. 如與英文�(shuō)明書(shū)有異,以英文�(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)�

文本�:  �(jì)算:

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐�(biāo)�

在坐�(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD  

值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃�;再乘以稀�  

倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出�(biāo)  

�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD�  

代入方程�,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀�  

倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃��              

 

                                          

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.92以上�

2.批內(nèi)與批�(jiàn)�(yīng)分別小于9%�15%

 

檢測(cè)范圍�                                             

0.2 ng/ml -12 ng/ml                                 

                         

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8��

2.有效期�6�(gè)�

上海一研生物科技有限公司作�

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