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技術中�

兔子糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒實驗原�

2019�02�22� 15:28:48人氣�302來源�上海一研生物科技有限公司

資料類型docx文件資料大小28919
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� � �上海一研生物科技有限公司 需要積�0
� � �兔子糖胺聚糖,GAG,ELISA試劑�
【資料簡介�

兔子糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑�使用實驗原理�

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔子糖胺聚�(GAG)水平。用純化的兔子糖胺聚�(GAG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入糖胺聚糖(GAG),再與HRP標記的糖胺聚�(GAG)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖胺聚�(GAG)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中兔子糖胺聚�(GAG)含量�

試劑盒組成:

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�

1�

 

酶標包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

標準品:2700μg/L

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

標準品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標試劑

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

樣本處理及要求:

血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�
血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心�
尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�
細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100�/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�
標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融.
不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
兔子糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑�操作步驟

標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10孔,在、第二孔中分別加標準�100μl,然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為1800μg/L�1200μg/L�600μg/L�300μg/L�150μg/L)�
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
溫育:操作同3�
洗滌:操作同5�
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行�
兔子糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑�注意事項�

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間建議控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣�
請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
底物請避光保存�
嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
本試劑不同批號組分不得混用�
如與英文說明書有異,以英文說明書為準�
計算�

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

標準曲線� 

(此圖僅供參考)

試劑盒性能�

樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上�
批內與批間應分別小于9%�11%
檢測范圍�

  100μg/L-2000μg/L

保存條件及有效期�

試劑盒保存:2-8℃�
有效期:6個月

上海一研生物科技有限公司作�

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