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技術中�

鴨瘟病毒抗體(CSFV-Ab)試劑盒(ELISA�

2020�07�28� 09:54:12人氣�71來源�上海卡努生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小497057
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� � �上海卡努生物科技有限公司 需要積�0
� � �鴨瘟病毒抗體,(CSFV-Ab�,試劑盒(ELISA�,試劑�,(ELISA�
【資料簡介�

本試劑盒用于體外定性檢�血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本鴨瘟病毒抗體CSFV-Ab)�

有效期:6個月

保存條件�2-8�

 

 

實驗原理

試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被鴨瘟病毒抗體(CSFV-Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、陰性和陽性對照,再加入HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鴨瘟病毒抗體(CSFV-Ab)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽性�

 

樣本處理及要�

1.  血�將收集于血清分離管的全血標本在室溫放�2小時�過夜,然�1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置�-20�-80保存,但應避免反復凍融�
2.  血�用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置�-20�-80保存,但應避免反復凍融�
3.  組織勻漿�用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比�1g的組織樣品對�9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。zui�將勻漿液�5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測�

4.  細胞培養物上清或其它生物標本��1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�

注:標本溶血會影響zui�檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測�

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標儀�450nm�
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組�

 

名稱

96孔配�

48孔配�

備注

微孔酶標�

96

48

陰性對�

0.3mL

0.3mL

陽性對�

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖�

25mL

15mL

按說明書進行稀�

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止�

6mL

3mL

封板�

2�

2�

說明�

1�

1�

自封�

1�

1�

 

注意事項

  • 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑�
  • 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉�
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值�
  • 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用�
  • 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果�
  • 在儲存和溫育時避免強光直接照射�
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上�
  • 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性�
  • 不能使用過期產品�
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置

 

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用�

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1�20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水�

 

操作步驟

  1.   從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�
  2.   設置陰性對�、陽性對照孔和樣本孔�陰性、陽新對照孔各加50μL對照品,樣本�待測樣本50μL空白孔不加�
  3.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
  4.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌��350μL,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)�
  5.   每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
  6.   每孔加入終止�50μL�15min內,�450nm波長處測定各孔的OD值�

 

實驗結果計算

1. 陰性對照OD值:小于0.2�

2. 陽性對照OD值:大于0.8�

3、陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD�+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性�

4、重復性:板內變異系數小于15%�

5、儲藏:2-8℃避光密封保存�

上海卡努生物科技有限公司作�

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