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技術中�

內氏放線菌PCR檢測試劑盒實驗原�

2020�07�31� 14:47:56人氣�113來源�上海谷研實業有限公司

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� � �上海谷研實業有限公司 需要積�0
� � �內氏放線菌PCR檢測試劑�,內氏放線菌PCR檢測試劑�
【資料簡介�

內氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書

產品名稱�內氏放線菌PCR檢測試劑�
產品規格�50T
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)斷進行快速酶促擴�,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數�(+E)n(0<E�,擴增效率=�,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可�。產品僅用于科研實驗

特異性強

PCR反應的特異性決定因素為�

①引物與模板DNA特異正確的結合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實��

④靶基因的特異性與保守��


產品特點�
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定� PCR 產品�
具有下列特點�
.根據 指標的保守序列設計的專一性引�,與相關病毒無交叉反��
2.靈敏度比常規 PCR � 2-3 個數量級,可以達到幾百拷�/反應�
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模�,操作簡�,定量準確快速�
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續污��
5.本試劑盒足夠 50 � 20μL 反應體系的熒光定� PCR�
6.本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷�
規格及成�                            成分
 2×qPCR MagicMix                 500 μL(裝 A 袋)
微量核酸稀釋液(熒� PCR � mL(裝 A 袋)
PCR 引物混合�                        00 μL(裝 A 袋)
基因陽性對�                           50 μL(裝 B 袋)
DNA 病毒裂解液(試用裝)       5 次(9 mL�
使用手冊                              �
運輸及保存:低溫運輸�-20℃保�(A 袋試劑放樣品準備區、B 袋的陽性對照好分開放置)�
自備試劑DNA 模板�0×ROX(根據機型決�,具體見使用方法��
應用案例
內氏放線菌PCR檢測試劑�樣品 DNA 的制�
.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容�。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病� DNAout� 本試劑盒免費贈� 5 � DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)�
稀釋陽性對照(� 0E2-0E7 � 6 � 0 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常�,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對�,只提供可以直接使用的長� 86bp � DNA 段作為陽性對照�
2.標記 6 個離心管,分別為 7�6�5�4�3�2�
3.用帶芯槍頭分別加� 45 μL 模板稀釋液(好用帶芯槍�,下同)�
4.� 7 號管中加� 5 μL ×0E8 拷貝/μL 的陽性對�,充分震� 分鐘,得×0E7 拷貝/μL 的陽性對�。放冰上待用�5.換槍頭,� 6 號管中加� 5 μL ×0E7 拷貝/μL 的陽性對�(上步稀釋所�),充分震� 分鐘,得 ×0E6 拷貝/μL 的陽性對�。放冰上待用�
6.換槍�,在 5 號管中加� 5 μL ×0E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 分鐘,得 ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用�
7.換槍頭,� 4 號管中加 5 μL ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,�×0E4 拷貝/μL 的陽性對�。放冰上待用�8.重復上面的操作直到得� 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用�
設置 qPCR 反應�20  μL 體系,在樣品制備室進行�
9.內氏放線菌PCR檢測試劑�� PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一�。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對�,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加)�
�:� ABI7500�7700 � 7900 儀器需要使� ROX 作為對照,其他熒� PCR 儀器(� iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 � LightCycler480)不需要使� ROX,則用水替代�
0. 蓋上蓋子后上�,按下面參數進行 PCR(具� PCR 參數可以根據儀器不同而自�
優化��
過程溫度時間
預變�95� 分鐘
PCR 反應95�5 �
�30 個循環)60�5 �
72�5 �
. 數據采集
具體操作按所用儀器的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合 DNA ��
大吸收光譜在 47 nm,結� DNA 時的大吸收光譜在 500 nm,大發射�
譜在 530 nm�
�、數據處�
2. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣�
� Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度� log �,再推算出其濃度�
組成及試劑配�:

、酶標板:一塊(96孔)

2� 標準品(凍干品)� 2�,請臨用�5分鐘內配�。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約0分鐘,同時反復顛�/搓動以助溶解,其濃度�200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L�00 U/L�50 U/L�25 U/L�2.5 U/L�6.25 U/L�3.2 U/L,樣品稀釋液直接作為空白� 0 U/L。如配制00 U/L標準品:�0.3ml (不要少�0.3ml �200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推�

3� 樣品稀釋液�×20ml�

4� 檢測稀釋液A�×0ml�

5� 檢測稀釋液B�×0ml�
內氏放線菌PCR檢測試劑�注意事項�

.基礎程序;

2.擴增溫度和延伸溫度�

3.反應時間;

4.循環次��

5.PCR 反應液的配制�

6.PCR技術的基本原理�

7.PCR的反應動力學�

8.PCR擴增產物�

9.PCR反應體系與反應條��   

【儲存條件及有效期�:

-20℃避光保�,避免反復凍�,有效期6個月�

【適用儀器�:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀�

【樣本采�、存放及運輸�

u 樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集�

u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h�-70℃以下可保存,但應避免反復凍融(多凍�3次)�

u 運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸�

【自備試劑�:產品僅用于科研實�

上海谷研實業有限公司作�

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