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大鼠纖連蛋�(FN)說明�
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� � � | 大鼠纖連蛋�(FN)說明�,大鼠纖連蛋� |
- 【資料簡介�
- 大鼠纖維連接蛋白(FN)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用�檢測范圍� 96T2�5ng/ml - 80 ng/ml使用目的�本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中纖維連接蛋白(FN)含量�實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本�大鼠纖維連接蛋白(FN)水平。用純化�大鼠纖維連接蛋白(FN)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入纖維連接蛋白(FN)�再與HRP標記�纖維連接蛋白(FN)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�纖維連接蛋白(FN)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD�),通過標準曲線計算樣品�大鼠纖維連接蛋白(FN)濃度�試劑盒組�130倍濃縮洗滌液20ml×1�7終止�6ml×1�2酶標試劑6ml×1�8標準�(160ng/ml)0.5ml×1�3酶標包被�12�×8�9標準品稀釋液1.5ml×1�4樣品稀釋液6ml×1�10說明�1�5顯色劑A�6ml×1�11封板�2�6顯色劑B�6ml×1/�12密封�1�標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�操作步驟1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�80ng/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液40ng/ml4號標準品150μl�5號標準品加入150μl標準品稀釋液20ng/ml3號標準品150μl�4號標準品加入150μl標準品稀釋液10ng/ml2號標準品150μl�3號標準品加入150μl標準品稀釋液5ng/ml1號標準品150μl�2號標準品加入150μl標準品稀釋液2. 加樣:分別設空白�(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相�)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5�)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�7. 溫育:操作同3�8. 洗滌:操作同5�9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(此時藍色立轉黃色)�11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD�)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�操作程序總結�計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�注意事項1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�4� 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過�(樣本OD值大于標準品�*孔的OD�),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n�)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)�5� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�6.底物請避光保存�7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�9.本試劑不同批號組分不得混用�10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8��2.有效期�6個月
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