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技�(shù)中心

大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒(ELISA�

2020�12�22� 10:14:05人氣�88來源�上海宇淳生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小513623
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� � �上海宇淳生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �大鼠氧化低密度脂蛋白,(OxLDL�,試劑盒(ELISA�,試劑�,(ELISA�
【資料簡(jiǎn)介�

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本大鼠氧化低密度脂蛋白OxLDL)的含量�

有效期:6�(gè)�

保存條件�2-8�

本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診�

 

�(shí)�(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)�往�(yù)先包大鼠氧化低密度脂蛋白OxLDL)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入�(biāo)本、標(biāo)�(zhǔn)品、HRP�(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下�(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�大鼠氧化低密度脂蛋白OxLDL)呈正相�(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度�

 

樣本處理及要�

1.  血�將收集于血清分離管的全血�(biāo)本在室溫放置2小時(shí)�過夜,然�1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20�-80保存,但�(yīng)避免反復(fù)凍融�
2.  血�用EDTA或肝素作為抗凝劑采集�(biāo)本,并將�(biāo)本在采集后的30分鐘�(nèi)�2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20�-80保存,但�(yīng)避免反復(fù)凍融�
3.  組織勻漿�用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響�(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與�(duì)�(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比�1g的組織樣品對(duì)�(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)�(shí)�(yàn)需要適�(dāng)�(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了�(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以�(duì)勻漿液�(jìn)行超聲破碎,或反�(fù)凍融。zui�將勻漿液�5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)�

4.  �(xì)胞培�(yǎng)物上清或其它生物�(biāo)本:�(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融�

注:�(biāo)本溶血�(huì)影響zui�檢測(cè)�(jié)果,因此溶血�(biāo)本不宜�(jìn)行此�(xiàng)檢測(cè)�

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀�450nm�
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組�

 

名稱

96孔配�

48孔配�

備注

微孔酶標(biāo)�

12�×8

12�×4

�(biāo)�(zhǔn)�

0.3mL*6�

0.3mL*6�

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖�

25mL

15mL

按說明書�(jìn)行稀�

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止�

6mL

3mL

封板�

2�

2�

說明�

1�

1�

自封�

1�(gè)

1�(gè)

1.  �(biāo)�(zhǔn)品濃度依次為�8�4�2�1�0.5�0.25 ng/mL

2.  �(jīng)過大量正常標(biāo)本檢�(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢�(cè)范圍�(nèi),實(shí)�(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)�(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本�(jìn)行適�(dāng)稀釋后再�(jìn)行實(shí)�(yàn)�

 

注意事項(xiàng)

  • �(yán)格按照規(guī)定的�(shí)間和溫度�(jìn)行溫育以保證�(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前�(dá)到室�20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑�
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不�(zhǔn)確的�(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔�(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉�
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值�
  • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用�
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成�(cuò)誤結(jié)果�
  • 在儲(chǔ)存和溫育�(shí)避免�(qiáng)光直接照射�
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上�
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都�(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性�
  • 不能使用過期�(chǎn)品�
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照�(guī)定的程序處理樣品和檢�(cè)裝置

 

試劑�(zhǔn)�

試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平衡后方可使用�

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1�20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水�

 

操作步驟

  1.   從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�
  2.   �(shè)置標(biāo)�(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)�(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)�(zhǔn)�50μL�
  3.   樣本�待測(cè)樣本50μL;空白孔不加�
  4.   除空白孔外,�(biāo)�(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反�(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌��350μL,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)�
  6.   每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
  7.   每孔加入終止�50μL�15min�(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值�

 

�(shí)�(yàn)�(jié)果計(jì)�

所�(cè)�(biāo)�(zhǔn)品的OD�為橫坐標(biāo)��(biāo)�(zhǔn)品的濃度值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制�(biāo)�(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,�(jì)算出樣品濃度

 

試劑盒性能

  •  檢測(cè)范圍0.25 ng/mL  8 ng/mL
  •  靈敏度:zui�檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)�(gòu)類似物交叉反�(yīng)�
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% �板間變異系數(shù)小于15% 

 

說明

由于�(xiàn)有條件及科學(xué)技�(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料�(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的�(zhì)量技�(shù)�(fēng)�(xiǎn)�

  • zui終的�(shí)�(yàn)�(jié)果與試劑的有效性、實(shí)�(yàn)者的相關(guān)操作以及�(dāng)�(shí)的實(shí)�(yàn)�(huán)境密切相�(guān),請(qǐng)�(wù)必準(zhǔn)備充足的�(biāo)本備份�
  • 不同批次的同一�(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色�(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書�(jìn)行實(shí)�(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考�
  • 只有全部使用本試劑盒配套試劑�能保證檢�(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的�(shí)�(yàn)說明才會(huì)得到*的檢�(cè)�(jié)果�
  • 本公司只�(duì)試劑盒本身負(fù)�(zé),不�(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)�(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,�(yù)留充足的樣本�
  • 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能�(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA�(shí)�(yàn)�(jié)果偏差�
  • 若樣本為�(xì)胞培�(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀�(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢�(cè)不出的情況�
  • 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能�?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢�(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢�(cè)出�

 

上海宇淳生物科技有限公司作�

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