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核酸雜交技�(shù)

2012�05�08� 09:30:44人氣�410�(lái)源:上海一基實(shí)�(yè)有限公司

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�(guān) � �核酸雜交技�(shù)
【資料簡(jiǎn)介�

核酸雜交技�(shù)是較早的�(yīng)用于病原微生物的檢測(cè)技�(shù)。因其操作步驟比較煩瑣,�(xiàn)在在�(dòng)物檢�(yàn)檢疫中應(yīng)用較少,但是它是其他一些核酸檢�(cè)技�(shù)的基�(chǔ)。它的基本步驟如下�
首先,制備一段寡核苷酸,其序列對(duì)�(yīng)于被�(cè)病原微生物某段特異性核酸序列,在此寡核苷酸上�(jìn)行適�(dāng)?shù)�?biāo)記,作為檢測(cè)用探針�

然后,從樣品中提取核酸,�(duì)此核酸�(jìn)行變性處理后固定在固相載體上,這些核酸變性處理后多數(shù)以單鏈的形式存在,因此它們能夠利用堿基互�(bǔ)原理,結(jié)合并固定探針,由于借助探針上標(biāo)記的物質(zhì)可以了解到是否有探針,甚至有多少探針被固定上去,再由此推知樣品中是否含有及甚至含有多少病原微生物�

上述是zui常用的固相雜交大致過(guò)程,除此之外還有液相雜交以及用于研究的細(xì)胞內(nèi)定位(原位)雜交模式。新近發(fā)展的核酸芯片技�(shù)�(shí)際上也是一類核酸雜交技�(shù)�

就固相雜交而言,又可分為斑�(diǎn)雜交和凝膠電泳印跡轉(zhuǎn)移雜交。斑�(diǎn)雜交是直接將�(biāo)本點(diǎn)在固相載體上雜交,該法迅速簡(jiǎn)單,一次可檢測(cè)大量�(biāo)本;凝膠電泳印跡�(zhuǎn)移雜交是電泳技�(shù)和雜交技�(shù)�(jié)合的一種方法,根據(jù)雜交核酸的不同,又可分為Southern印跡法(檢測(cè)DNA)及Northern印跡法(檢測(cè)RNA)。傳�(tǒng)的固相載體多�(yīng)用硝酸纖維膜和尼龍膜,近年來(lái)�(fā)展的微孔板包被技�(shù)以微孔板為載體取得了良好的效果�

探針�(biāo)記物有放射性核素與非放射性物�(zhì)兩種。放射性核素標(biāo)記敏感性高,可檢測(cè)出pg水平的核酸,但因不易�(zhǎng)期保存,且存在放射性污染等問題,現(xiàn)已較少應(yīng)用。非放射性物�(zhì)常用的有*、地高辛等,非放射性探針安全、穩(wěn)定、操作方便并且經(jīng)�(jì),但敏感性較低,近年�(lái),由于雜交信�(hào)檢測(cè)方法的改�(jìn),檢�(cè)的敏感性得到了很大提高�

上海一基實(shí)�(yè)有限公司作�

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