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胃泌素釋放肽前體定量試劑盒說明書

2022�03�02� 15:43:28人氣�98�(lái)源:上海博湖生物科技有限公司

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�(guān) � �胃泌素釋放肽前體定量試劑�,說明�
【資料簡(jiǎn)介�

胃泌素釋放肽前體定量試劑盒說明書

本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化�血清素/血清胺(ST)抗體包被微孔�,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST)�再與HRP�(biāo)記的血清素/血清胺(ST)抗體�(jié)�,形成抗�-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中�血清素/血清胺(ST)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中血清素/血清胺(ST)濃度�

�(biāo)本要�: 

1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)�,提取后�(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保�,但�(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢�(cè)含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活��

樣本處理及要求:
1.血清:全血�(biāo)本請(qǐng)于室溫放�2小時(shí)�4℃過夜后�1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)�?biāo)本放�-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融�
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘�(nèi)�2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)�?biāo)本放�-20℃或-80℃保�,但�(yīng)避免反復(fù)凍融�
3.  組織勻漿:用�(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響�(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪�。將剪碎的組織與�(duì)�(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比�1g的組織樣品對(duì)�(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)�(shí)�(yàn)需要適�(dāng)�(diào)�,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了�(jìn)一步裂解組織細(xì)�,可以對(duì)勻漿液�(jìn)行超聲破�,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)�
4.  �(xì)胞培�(yǎng)物上清或其它生物�(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)�?biāo)本放�-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融�

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�。稀釋度的線�。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�

操作步驟

1. �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一�,用戶可按照下列圖表在小試管中�(jìn)行稀��

80pg/ml

5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

40pg/ml

4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl�5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

20pg/ml

3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl�4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

10pg/ml

2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl�3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

5pg/ml

1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl�2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔、待�(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl,待�(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�

3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�

6. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�

7. 溫育:操作同3�

8. 洗滌:操作同5�

9. 顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�10分鐘.

10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色��

11. �(cè)定:以空白孔�(diào)��450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)��

操作程序總結(jié)�

 操作程序總結(jié).png


�(jì)�

  以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)�OD值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃��

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使�,酶�(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析�,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助�,洗滌時(shí)不影響結(jié)果�

3.各步加樣均�(yīng)使用加樣�,并�(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確�,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加��

4� �(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,最好做�(fù)�。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣�OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再�(cè)�,計(jì)算時(shí)�(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5��

5� 封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�

6.底物請(qǐng)避光保存�

7.嚴(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理�

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存��2-8��

2.有效期�6�(gè)�

 


上海博湖生物科技有限公司作�

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