上海莼試生物技術有限公�作�
牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑盒實驗原�
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� � � | 牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑�,牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑�,牛鋅金屬 |
- 【資料簡介�
牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑�說明�
elisa試劑盒常見組成部分:
1)酶和底物:在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP�
2)抗體:在ELISA中應用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)�
3)抗原:在ELISA中應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有三類,即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原�
4 人E選擇�(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒包被:將免疫活性物�(抗原或抗�)結合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等;常用的方法有吸附法、化學交聯法及親和素間接包被�
5)固相載體:固相載體是ELISA中用以分離結合標記物和游離標記物的主要手段,應與各種免疫活性物質有良好的結合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜�
牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑�樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等�
�1)血�
室溫血液自然凝�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
�2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
�3)尿液:
用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行�
�4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清�
�5)培養細�
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100�/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
�6)組織標�
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試�, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10孔,在di一、第二孔中分別加標準�100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別�50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為180 ng/L�120 ng/L �60 ng/L�30 ng/�15 ng/L)�
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品最終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘�
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制�5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
5. 底物請避光保存�
6. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
7. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
8. 本試劑不同批號組分不得混用�
9.如需代測或者樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間避免反復凍融�-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月�
10.牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑�試劑使用須知�
11.�1)請參照相關法規、文獻、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作�
12.�2)通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理�
13.�3)萬一試劑操作者并非專業技術人員。必須在專業人士的指導監督下進行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應按照相關法律法規正當處理�
14.�4)購買后,請務必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認標簽上的注意事項,做好必要的安全對策;對沒有標明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進行操作;必須帶好防護用具,小心翼翼進行操作�
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