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技�(shù)中心

大鼠二酰基甘油(DAG/DG)定量檢�(cè)試劑盒(ELISA�

2012�07�05� 13:37:29人氣�1006�(lái)源:上海卡努生物科技有限公司

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� � �上海卡努生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �大鼠二酰基甘油(DAG/DG)定量檢�(cè)試劑盒(ELISA�,上海卡努生物,elisa
【資料簡(jiǎn)介�

 

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)�(xué)診斷�

 

大鼠二酰基甘�(DAG/DG�定量檢測(cè)試劑盒(ELISA

使用�(shuō)明書(shū)

                                                      

【試劑盒名稱(chēng)�

大鼠二酰基甘�(DAG/DG�定量檢測(cè)試劑盒(ELISA

 

【試劑盒用�

定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、細(xì)胞培�(yǎng)液及其它相關(guān)液體樣本�二酰基甘�(DAG/DG�的含量�

 

【檢�(cè)原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶�(lián)免疫吸附法(ELISA)。將�(biāo)�(zhǔn)品、待�(cè)樣本加入到預(yù)先包�大鼠二酰基甘�(DAG/DG�抗體透明酶標(biāo)包被板中�溫育足夠�(shí)間后,洗滌除去未�(jié)合的成分�再加入酶�(biāo)工作液,溫育足夠�(shí)間后,洗滌除去未�(jié)合的成分。依次加入底�AB,底物(TMB)在辣根�(guò)氧化物酶�HRP)催化下�(zhuǎn)化為�(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色�顏色的深淺與樣品�大鼠二酰基甘�(DAG/DG�濃度呈正相關(guān)�450nm波長(zhǎng)下測(cè)�OD值,根據(jù)�(biāo)�(zhǔn)品和樣品�OD值,�(jì)算樣本中大鼠二酰基甘�(DAG/DG�含量�

 

【試劑盒組成

1

酶標(biāo)包被�

12×8

7

顯色�A

6mL

2

�(biāo)�(zhǔn)品(32ng/mL

0.6mL

8

顯色�B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止�

6mL

4

*

6mL

10

�(shuō)明書(shū)

1

5

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

6mL

11

封板�

2

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封�

1�(gè)

備注��(biāo)�(zhǔn)品用�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液倍比稀釋為�32168421ng/mL.

 

需要而未提供的試劑和器材

137恒溫�

2��(biāo)�(zhǔn)�(guī)格酶�(biāo)儀

3�精密移液器及一次性吸�

4�蒸餾�

5�一次性試�

6�吸水�

【操作步驟�

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平�30分鐘�

2、配液:用蒸餾水�20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液�

3、加�(biāo)�(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠�(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上�分別�(shè)置標(biāo)�(zhǔn)品孔、待�(cè)樣本孔和空白�(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)�(zhǔn)品孔中加入標(biāo)�(zhǔn)�50μL;待�(cè)樣本孔中先加入待�(cè)樣本10μL,再�*40μL(即樣本稀�5倍);空白對(duì)照孔不加�

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)�

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作�50μL,空白對(duì)照孔不加�

7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)�

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色�B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯�15min

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反�(yīng)(顏色由�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�

11、測(cè)定:以空白孔�(diào)零,在終止后15分鐘�(nèi),用450nm波長(zhǎng)�(cè)量各孔的吸光值(OD值)�

12、計(jì)算:根據(jù)�(biāo)�(zhǔn)品的濃度及對(duì)�(yīng)�OD值,�(jì)算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根�(jù)樣本�OD值,在回歸方程上�(jì)算出�(duì)�(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)�(jì)算。zui終濃度為�(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)�

 

【樣本要求�

1、樣�不能含疊氮鈉(NaN3,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根�(guò)氧化物酶�HRP)的抑制劑�

2��(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融�

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒�

 

【注意事�(xiàng)�

1、實(shí)�(yàn)�(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作�(jìn)行,�(shí)�(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn)�

2酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存�

3、建議所有的�(biāo)�(zhǔn)品、樣本和空白�(duì)照都做雙份檢�(cè),取平均值,以減小實(shí)�(yàn)誤差�

4、牢記樣本已�(jīng)稀�5倍,�(jì)算結(jié)果乘�5才是樣本�(shí)際濃度�

5、若顯色�(guò)淺,可適�(dāng)延長(zhǎng)底物溫育�(shí)間�

6、為避免交叉污染,標(biāo)�(zhǔn)品、樣本和空白�(duì)照每加一�(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液�*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微�;不得重�(fù)使用封板�

7、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批�(hào)的試劑不得混用�

8、底�B�(duì)光敏感,避免�(zhǎng)�(shí)間暴露于光下�

 

【操作程序總�(jié)�

 

�(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)�(zhǔn)�

 


 

加入�(zhǔn)備好的樣品和�(biāo)�(zhǔn)品,37℃反�(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入酶標(biāo)試劑�37℃反�(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入顯色�AB37℃顯�15分鐘

 

加入終止�

 

15分鐘之內(nèi)讀OD

 

�(jì)�

 

檢測(cè)范圍

1ng/mL – 32ng/mL

【規(guī)格�

96T/

【貯藏�

2-8℃,避光防潮保存�

【有效期�

6�(gè)�

上海卡努生物科技有限公司作�

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