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技術中�

小鼠音猬因子N端(Shh-N)酶�(lián)免疫分析(ELISA�

2012�08�06� 17:34:29人氣�286來源�上海科研ELISA試劑盒專�

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� � �上海科研ELISA試劑盒專� 需要積�0
� � �小鼠音猬因子N端(Shh-N)酶�(lián)免疫分析(ELISA�
【資料簡介�

小鼠音猬因子N(Shh-N�酶聯(lián)免疫分析�ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,細胞上清及相關液體樣本中音猬因子N(Shh-N�含量�

實驗原理�

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠音猬因�N(Shh-N�水平。用純化的小鼠音猬因�N(Shh-N�抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入音猬因子N(Shh-N�,再與HRP標記的音猬因�N(Shh-N�抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的音猬因�N(Shh-N�呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度�OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠音猬因�N(Shh-N�濃度�

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1

1

 

封板�

2片(48

2片(96

 

密封�

1

1

 

酶標包被�

1×48

1×96

2-8保存

標準品:1800ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止�

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌�

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心�

2. 血漿:應根�(jù)標本的要求選�EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心�

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量�PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/span>2-8的溫度。加入一定量�PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20保存,但應避免反復凍�.

7. 不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的�HRP)活性�

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為1200ng/L,800ng/L ,400ng/L,200ng/L, 100ng/L)�

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)�待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�

3.         溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘�

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用�

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�

6.         加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度�OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

注意事項�

1�  試劑盒從冷藏�(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2�  濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3�  各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣�

4�  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)�n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�

5�  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6�  底物請避光保存�

7�  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀�(shù)為準.

8�  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9�  本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

計算�

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品�OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀�      

倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出�      

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度�                  

 

                                              

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上�

2.批內與批見應分別小于9%11%

 

檢測范圍�                                             

60ng/L -1600ng/L                                        

                           

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期�6個月

 

 

 

 

 

 

上海科研ELISA試劑盒專�作�

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