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技�(shù)中心

人線粒體呼吸鏈復(fù)合物III(輔酶Q-*還原酶)�

2013�05�10� 09:36:00人氣�192�(lái)源:上海卡努生物科技有限公司

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�(guān) � �上海卡努生物科技有限公司,ELISA,試劑,ELISA試劑
【資料簡(jiǎn)介�

酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿,�(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中線粒體呼吸鏈復(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�的活性�

�(shí)�(yàn)原理�

   本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人線粒體呼吸鏈復(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�水平。用純化的人線粒體呼吸鏈�(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入線粒體呼吸鏈�(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�,再�HRP�(biāo)記的線粒體呼吸鏈�(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�(guò)*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的線粒體呼吸鏈復(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度�OD值),通過(guò)�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中人線粒體呼吸鏈復(fù)合物III�輔酶Q-�(xì)胞色�C還原�濃度�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

�(shuō)明書(shū)

1

1

 

封板�

2片(48

2片(96

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品:135U/mL

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保�

顯色�A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保�

顯色�B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保�

終止�

3ml×1

6ml×1

2-8℃保�

濃縮洗滌�

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保�

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用�(wú)菌管收集,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�

4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用�(wú)菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100�(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量�PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量�PBSPH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用�

6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,��(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根�(guò)氧化物酶的(HRP)活性�

 

操作步驟�

1.         �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10孔,�*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為90U/mL60U/mL 30U/mL15U/mL7.5U/mL)�

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)�待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶�(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�

3.         溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用�

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加�(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�

6.         加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�

11.     �(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘�?xún)?nèi)�(jìn)行�

 

注意事項(xiàng)�

1�  試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2�  濃洗滌液可能�(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�

3�  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣�

4�  �(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量�(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)�n倍)后再�(cè)定,�(jì)算時(shí)�(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�

5�  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6�  底物�(qǐng)避光保存�

7�  �(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8�  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�

9�  本試劑不同批�(hào)組分不得混用�

10. 如與英文�(shuō)明書(shū)有異,以英文�(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)�

 

�(jì)算:

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)�OD值為縱坐�(biāo)�   

在坐�(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品�OD     

值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀�      

倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度�OD值計(jì)算出�(biāo)      

�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品�OD      

代入方程式,�(jì)算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃度�                  

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.95以上�

2.批內(nèi)與批�(jiàn)�(yīng)分別小于9%11%

 

 

檢測(cè)范圍�                                             

5U/mL - 110U/mL

                                       

                           

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期�6�(gè)�

 

上海卡努生物科技有限公司作�

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