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技術中�

Rat vascular endothelial growth factor

2013�07�18� 15:11:39人氣�251來源�上海廣銳生物科技有限公司

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【資料簡介�

中國科研試劑供應商之一�上海廣銳生物科技有限公司專業經銷眾多生命科學領域�ELISA試劑��生物試劑,抗�,培養基,血�。質量被全國各大院校科研機構認可,作為戰略合作伙伴�可免費提供代測服務,咨詢

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大鼠血管內皮生長因子(VEGF�酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本�血管內皮生長因子(VEGF�的含��

實驗原理�

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大�血管內皮生長因子(VEGF�水平。用純化的大�血管內皮生長因子(VEGF�抗體包被微孔�,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血管內皮生長因子(VEGF��再與HRP標記�VEGF抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合�,經�*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�血管內皮生長因子(VEGF�呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度�OD值),通過標準曲線計算樣品中大�血管內皮生長因子(VEGF�濃度�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1

1

 

封板�

2片(48

2片(96

 

密封�

1

1

 

酶標包被�

1×48

1×96

2-8保存

標準品:360ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止�

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌�

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上�,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘�,離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心�

3. 尿液:用無菌管收�,離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上�,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份�,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上�。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成�。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量�PBS�PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量�PBSPH7.4�,用手工或勻漿器將標本勻漿充�。離�20分鐘左右�2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備��

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20保存,但應避免反復凍�.

7. 不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的�HRP)活性�

 

操作步驟�

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10�,在*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混�;然后從*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四�,再在第�、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混�;然后在第三孔和第四孔中先各�50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混�;混勻后從第�、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔�,再在第�、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第�、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔�,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為240ng/L�160ng/L �80ng/L�40ng/L� 20ng/L��

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)�待測樣品�。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶標板孔底�,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混��

3.         溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘�

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用�

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍��

6.         加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5�

9.         顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混��37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色��

11.     測定:以空白空調��450nm波長依序測量各孔的吸光度�OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

 

注意事項�

1�  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�15-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用�,板條應裝入密封袋中保存�

2�  濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助�,洗滌時不影響結��

3�  各步加樣均應使用加樣�,并經常校對其準確�,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

4�  請每次測定的同時做標準曲�,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數�n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5��

5�  封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�

6�  底物請避光保��

7�  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.

8�  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9�  本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有�,以英文說明書為準�

 

計算�

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲�,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀�      

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出�      

準曲線的直線回歸方程�,將樣品�OD      

代入方程�,計算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數,即為樣品的實際濃度�                  

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上�

2.批內與批見應分別小于9%11%

 

 

檢測范圍�                                             

15ng/L -300ng/L                                       

                           

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8�

2.有效期�6個月

 

上海廣銳生物科技有限公司作�

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