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技術中�

人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)ELISA試劑�

2013�08�17� 14:12:30人氣�209來源�上海安研商貿有限公司

資料類型doc文件資料大小50688
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� � �上海安研商貿有限公司 需要積�0
� � �人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)ELISA試劑�,人冠狀病毒(Coronavirus
【資料簡介�

人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)酶聯免疫分�

ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�

 目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)含量�

實驗原理�

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)水平。用純化的人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入冠狀病毒(Coronaviruses IgG),再與HRP 標記的冠狀病毒(Coronaviruses IgG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的冠狀病毒(Coronaviruses IgG)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人冠狀病毒(Coronaviruses IgG)濃度�

 

試劑盒組成:

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

 1�

1�

 

酶標包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

標準�

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

標準品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

樣本處理及要求:

1.血清:室溫血液自然凝�10-20 分鐘,離�20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�

2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心�

3.尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�

4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100 �/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離�20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�

5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20 分鐘左右�2000-3000 �/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�

 

操作步驟�

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10 孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl 棄掉�

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�

3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30 分鐘�

4. 配液:將30�48T �20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T �20 倍)倍稀釋后備用�

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30 秒后棄去,如此重�5 次,拍干�

6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�

7. 溫育:操作同3�

8. 洗滌:操作同5�

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.

10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)� 測定應在加終止液�15 分鐘以內進行�

注意事項�

1� 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2� 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3� 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

4� 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品�*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�

5� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6� 底物請避光保存�

7� 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.

8� 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9� 本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

 

計算�

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

 

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8℃�

2.有效期�6 個月

 

上海安研商貿有限公司作�

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