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技�(shù)中心

人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)ELISA試劑�

2013�08�19� 20:59:32人氣�319來源�上海安研商貿(mào)有限公司

資料類型doc文件資料大小50688
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�(guān) � �人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)ELISA試劑�,人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)ELISA試劑
【資料簡(jiǎn)介�

人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)酶�(lián)免疫分析

ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�

 目的:本試劑盒用于測(cè)定人血�,血漿及相關(guān)液體樣本中人粘蛋�/粘液�5B(MUC5B)含��

�(shí)�(yàn)原理�

本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)水平。用純化的人粘蛋�/粘液�5B(MUC5B)抗體包被微孔板,制成固相抗�,往包被單抗的微孔中依次加入粘蛋�/粘液�5B(MUC5B),再與HRP �(biāo)記的粘蛋�/粘液�5B(MUC5B)抗體結(jié)�,形成抗�-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)�,并在酸的作用下�(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)呈正相�(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中人粘蛋白/粘液�5B(MUC5B)濃度�

 

試劑盒組成:

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

 1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)�

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

樣本處理及要求:

1.血清:室溫血液自然凝�10-20 分鐘,離�20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2.血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝�,混�10-20 分鐘�,離�20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離��

3.尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)��

4.�(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用無菌管收�。離�20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸�,細(xì)胞濃度達(dá)�100 �/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5.組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱取重�。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)�?�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4�,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充�。離�20 分鐘左右�2000-3000 �(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備��

 

操作步驟�

1. �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10 �,在*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混�;然后從*孔、第二孔中各�100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混�;混勻后從第�、第六孔中各�50μl 分別加到第七、第八孔�,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第�、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl 棄掉�

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待�(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�

3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30 分鐘�

4. 配液:將30�48T �20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T �20 倍)倍稀釋后備用�

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30 秒后棄去,如此重�(fù)5 �,拍��

6. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�

7. 溫育:操作同3�

8. 洗滌:操作同5�

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�15分鐘.

10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色��

11. �(cè)定:以空白空�(diào)��450nm 波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD 值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)�(jìn)��

注意事項(xiàng)�

1� 試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2� 濃洗滌液可能�(huì)有結(jié)晶析�,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)��

3� 各步加樣均應(yīng)使用加樣�,并�(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確�,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣�

4� �(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再�(cè)�,計(jì)算時(shí)�(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5��

5� 封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�

6� 底物�(qǐng)避光保存�

7� �(yán)格按照說明書的操作�(jìn)�,試�(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8� 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�

9� 本試劑不同批�(hào)組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

 

�(jì)算:

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃��

 

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8℃�

2.有效期�6 �(gè)�

 

上海安研商貿(mào)有限公司作�

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