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技術中�

雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)酶聯免疫分析(ELISA�

2013�09�06� 12:08:13人氣�112來源�上海蔚霆生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小52224
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� � �上海蔚霆生物科技有限公司 需要積�0
� � �雞分泌型,免疫球蛋�,A(sIgA�,酶聯免疫分析,(ELISA�
【資料簡介�

雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)酶聯免疫分析(ELISA�

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用�

藥品名稱�

通用名:雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)酶聯免疫分析試劑盒

使用目的�

本試劑盒用于測定雞血清、血漿、或其它組織液中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量�

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平。用純化的抗-雞sIgA抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入sIgA,再與HRP標記的羊抗雞抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)濃度�

試劑�組成

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1�

7

終止�

6ml×1�

2

酶標試劑

6ml×1�

8

標準品(2700ng/L�

0.5ml×1�

3

酶標包被�

12�×8�

9

標準品稀釋液

1.5ml×1�

4

樣品稀釋液

6ml×1�

10

說明�

1�

5

顯色劑A�

6ml×1�

11

封板�

2�

6

顯色劑B�

6ml×1/�

12

密封�

1�

標本要求

1.標本處理:�1)血清或血漿:可直接用于檢�

            �2)組織:選取新鮮的組織,�2g組織用剪刀剪成小碎塊(2�5mm大小)。然后將組織碎塊加入10mL離心管,加入2mL樣品生理鹽水,,室溫下孵育5小時(期間不時旋渦混合)后勻漿,2500�/分離�10分鐘,取1ml上清液備用,待測�

            �3)培養物:向培養物中加入2ml生理鹽水,室溫孵�1小時(期間不時旋渦混合)�2500�/分離�10分鐘,取上清待測�

�4)按相關文獻提取后,取上清液待測

3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

4.可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融�

操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為�1800ng/L �1200ng/L �600ng/L�300ng/L � 150ng/L)�
  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻�
  3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘� 
  4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
  6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
  7. 溫育:操作同3�
  8. 洗滌:操作同5�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

  1. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
  2. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�

6.底物請避光保存。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

8.本試劑不同批號組分不得混用�

9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

檢測范圍�

100ng/L – 2000ng/L

規格�

96人份/�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃�

2.有效期�6個月

上海蔚霆生物科技有限公司作�

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