上海逸峰生物科技有限公司作�
牛腹瀉病� (DV)酶�(lián)免疫分析(ELISA�
資料類型 | doc文件 | 資料大小 | 105984 |
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�(guān) � � | 牛腹瀉病�, (DV�,酶聯(lián)免疫分析,(ELISA� |
- 【資料簡(jiǎn)介�
牛腹瀉病� �DV�酶聯(lián)免疫分析(ELISA�
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使� 目的:本試劑盒用于檢�(cè)牛血清,血漿及相關(guān)液體樣本中腹瀉病� (DV)水平,感染人的血液學(xué)診斷�
�(shí)�(yàn)原理�
本試劑盒采用雙抗體夾心酶�(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中牛腹瀉病� (DV�。用純化的牛腹瀉病� (DV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中腹瀉病� (DV)相�(jié)合,�(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP�(biāo)記的腹瀉病� (DV)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中牛腹瀉病� (DV�的存在與否�
試劑盒組��
試劑盒組�
48孔配�
96孔配�
保存
說明�
1�
1�
封板�
2片(48�
2片(96�
密封�
1�(gè)
1�(gè)
酶標(biāo)包被�
1×48
1×96
2-8℃保�
陰性對(duì)�
0.5ml×1�
0.5ml×1�
2-8℃保�
陽性對(duì)�
0.5ml×1�
0.5ml×1�
2-8℃保�
酶標(biāo)試劑
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
樣品稀釋液
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑A�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑B�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
終止�
3ml×1�
6ml×1�
2-8℃保�
濃縮洗滌�
�20ml×20倍)×1�
�20ml×30倍)×1�
2-8℃保�
樣本處理及要��
1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�
2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�
4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100�/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�
5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用�
6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟�
- 編號(hào):將樣品�(duì)�(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)�(shè)陰性對(duì)�2孔、陽性對(duì)�2孔、空白對(duì)�1孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)
- 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)�50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
- 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
- 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水�600ml后備�
- 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
- 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
- 溫育:操作同3�
- 洗滌:操作同5�
- 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘
- 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
- �(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�
�(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均�≥1.00; 陰性對(duì)照平均�≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界�=陰性對(duì)照孔平均�+0.15
陰性判定:樣品OD�< 臨界值(CUT OFF)者為腹瀉病� (DV)陰�
陽性判定:樣品OD�≥ 臨界值(CUT OFF)者為腹瀉病� (DV)陽�
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書�(jìn)行,本試劑不同批�(hào)組分不得混用�
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�
- 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
5.底物請(qǐng)避光保存�
6.試�(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)�(shí),參考波�(zhǎng)�630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理。終止液�2M的硫酸,使用�(shí)必須注意安全�
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃�
2.有效期�6�(gè)�
2024世環(huán)�(huì)【工�(yè)節(jié)能與�(huán)保展�

div6�3日,2024世環(huán)�(huì)【工�(yè)節(jié)能與�(huán)保展】于上海丨國(guó)家會(huì)展中[詳細(xì)]
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