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技�(shù)中心

牛腹瀉病� (DV)酶�(lián)免疫分析(ELISA�

2013�09�16� 09:18:17人氣�230來源�上海逸峰生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小105984
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� � �上海逸峰生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �牛腹瀉病�, (DV�,酶聯(lián)免疫分析,(ELISA�
【資料簡(jiǎn)介�

牛腹瀉病� DV酶聯(lián)免疫分析(ELISA�

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于檢�(cè)牛血清,血漿及相關(guān)液體樣本中腹瀉病� (DV)水平,感染人的血液學(xué)診斷�

�(shí)�(yàn)原理�

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶�(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中牛腹瀉病� (DV�。用純化的牛腹瀉病� (DV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中腹瀉病� (DV)相�(jié)合,�(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP�(biāo)記的腹瀉病� (DV)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中牛腹瀉病� (DV�的存在與否�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

陰性對(duì)�

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

陽性對(duì)�

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�

4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100�/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用�

6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

 

操作步驟�

  1. 編號(hào):將樣品�(duì)�(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)�(shè)陰性對(duì)�2孔、陽性對(duì)�2孔、空白對(duì)�1孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)
  2. 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)�50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
  3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘� 
  4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水�600ml后備�
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
  6. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
  7. 溫育:操作同3�
  8. 洗滌:操作同5�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
  11. �(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

 

�(jié)果判定:

  試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均�≥1.00; 陰性對(duì)照平均�≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界�=陰性對(duì)照孔平均�+0.15

  陰性判定:樣品OD�< 臨界值(CUT OFF)者為腹瀉病� (DV)陰�

  陽性判定:樣品OD�≥ 臨界值(CUT OFF)者為腹瀉病� (DV)陽�

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說明書�(jìn)行,本試劑不同批�(hào)組分不得混用�

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�

  1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

5.底物請(qǐng)避光保存�

6.試�(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)�(shí),參考波�(zhǎng)�630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理。終止液�2M的硫酸,使用�(shí)必須注意安全�

 

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃�

2.有效期�6�(gè)�

 

上海逸峰生物科技有限公司作�

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