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技術中�

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫分析(ELISA�

2013�09�30� 10:43:22人氣�114來源�上海蔚霆生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小48640
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� � �上海蔚霆生物科技有限公司 需要積�0
� � �豬腫瘤壞死因�,α(TNF-α�,酶聯免疫分析,(ELISA�
【資料簡介�

豬腫瘤壞死因�αTNF-α酶聯免疫分析(ELISA�

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用�

藥品名稱�

通用名:豬腫瘤壞死因�α(TNF-α)酶聯免疫分析試劑盒

使用目的�

本試劑盒用于測定豬血清、血漿、或其它組織液中腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量�

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化的豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α,再與HRP標記的羊抗豬抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬腫瘤壞死因子α呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度�

試劑盒組�

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1�

7

終止�

6ml×1�

2

酶標試劑

6ml×1�

8

標準品(450ng/L�

0.5ml×1�

3

酶標包被�

12�×8�

9

標準品稀釋液

1.5ml×1�

4

樣品稀釋液

6ml×1�

10

說明�

1�

5

顯色劑A�

6ml×1�

11

封板�

2�

6

顯色劑B�

6ml×1/�

12

密封�

1�

標本要求

1.標本采集后盡早進行實驗�

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

3.可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融�

操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為�300 ng/L�200ng/L �100ng/L�50 ng/L�25 ng/L)�
  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
  3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘� 
  4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
  6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
  7. 溫育:操作同3�
  8. 洗滌:操作同5�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

  1. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
  2. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�

6.底物請避光保存�

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9.本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

檢測范圍�

20ng/L -400 ng/L

規格�

96人份/�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃�

2.有效期�6個月

 

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