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大鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶聯免疫分析(ELISA�
資料類型 | doc文件 | 資料大小 | 123392 |
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� � � | 大鼠,1,4,5-三磷酸肌�,(IP3�,酶聯免疫分析,(ELISA� |
- 【資料簡介�
大鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶聯免疫分析(ELISA�
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使� 目的:本試劑盒用于測定大鼠血�,血�,細胞上清及相關液體樣本�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)的含量�
實驗原理�
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)水平。用純化的大�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體包被微孔板,制成固相抗�,往包被單抗的微孔中依次加入1,4,5-三磷酸肌醇(IP3),再與HRP標記�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體結�,形成抗�-抗原-酶標抗體復合�,經�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相�。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大�1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)濃度�
試劑盒組成:
試劑盒組�
48孔配�
96孔配�
保存
說明�
1�
1�
封板�
2片(48�
2片(96�
密封�
1�
1�
酶標包被�
1×48
1×96
2-8℃保�
標準品:90μg/L
0.5ml×1�
0.5ml×1�
2-8℃保�
標準品稀釋液
1.5ml×1�
1.5ml×1�
2-8℃保�
酶標試劑
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
樣品稀釋液
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑A�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑B�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
終止�
3ml×1�
6ml×1�
2-8℃保�
濃縮洗滌�
�20ml×20倍)×1�
�20ml×30倍)×1�
2-8℃保�
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘�,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離��
3. 尿液:用無菌管收�,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份�,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100�/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備�。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備��
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保�,但應避免反復凍�.
7. 不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活��
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�10�,在*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混�;然后從*�、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔�,再在第�、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔�,再在第�、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第�、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔�,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為60μg/L�40μg/L �20μg/L�10μg/L�5μg/L��
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混��
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍干�
6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�15分鐘.
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色��
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�
注意事項�
1� 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�15-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保��
2� 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
3� 各步加樣均應使用加樣�,并經常校對其準確�,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�
4� 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5��
5� 封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�
6� 底物請避光保存�
7� 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
8� 所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9� 本試劑不同批號組分不得混��
10. 如與英文說明書有�,以英文說明書為��
計算�
以標準物的濃度為橫坐�,OD值為縱坐標,
在坐標紙上繪出標準曲�,根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀�
倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出�
準曲線的直線回歸方程�,將樣品的OD�
代入方程式,計算出樣品濃�,再乘以稀�
倍數,即為樣品的實際濃度�
(此圖僅供參考)
試劑盒性能�
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上�
2.批內與批見應分別小于9%�11%
檢測范圍�
3μg/L -80μg/L
保存條件及有效期�
1.試劑盒保存:�2-8��
2.有效期�6個月
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