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即用型(兔IgG)SABC免疫組化染色試劑� �2�

2014�03�14� 11:11:36人氣�184來源�上海卡努生物科技有限公司

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� � �上海卡努生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �即用�,(兔IgG�,SABC免疫組化染色試劑� �2�
【資料簡介�

www.biokanu.com

即用�SABC免疫組化染色試劑�

IgG 使用說明�

�(chǎn)品編�(hào)�QD82102

試劑的保存:短期4可保存,長期-20

工作原理

S-Avidin(鏈霉親和�)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),分子量47000。同親和素一樣,�*分子�*的親和力,是一般抗原抗體親和力的一百萬倍。親和素是一�(gè)堿性蛋白質(zhì)�IP=10),�(jīng)改造后可以�(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電�(diǎn)接近中性,IP=6.0~6.5,對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低�SABC StreptAvidinBiotin  Complex,。根�(jù)研究�SABC大約可形成上百�(gè)左右的過氧化物酶和數(shù)十�(gè)左右的鏈霉親和素所�(gòu)成的�(fù)合物�SABC兼具高敏感性,低背景和操作簡便的優(yōu)�(diǎn)�

�(yīng)用范�

適用于免疫組織化�(xué)方法以顯示待測抗原的分布,本試劑盒適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片,培養(yǎng)固定的細(xì)胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等�

試劑盒中�(nèi)�

  1. 山羊血清封閉液�1ml(效價(jià)110,臨用前�TBSPBS稀�10)。用于組織切片的封閉�
  2. 二抗�1ml(效�(jià)110,臨用前用抗體稀釋液稀�10)。親和純化抗體,�(biāo)記長�*�*�(biāo)記抗�IgG
  3. SABC1ml(效�(jià)110,臨用前�SABC稀釋液稀�10倍)。鏈酶親和素-過氧化物酶復(fù)合物�

用戶自備試劑�

  1. 粘片�APESPoly-L-Lysine
  2. 0.01M PBS0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液�
  3. DAB顯色試劑盒�
  4. 免疫組化染色程序的選擇:

用戶需根據(jù)抗原/抗體的特�(diǎn)確定程序,多�(shù)情況下要先比較各程序染色�(jié)果�

石蠟切片染色程序:

  1. 載玻片防脫片劑處�:可選�APESPoly-Lysine。撈片后置烤�58-60 30-60分以使切片緊密粘附�
  2. 切片常規(guī)脫蠟至水�
  3. 3%H2O2 1+蒸餾�10份混�,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水�3次�
  4. 酶消化程�:滴加�(fù)合消化液5-10分鐘。蒸餾水�3次。也可以使用0.1%�*作消化液。熱修復(fù)抗原:將切片浸�0.01M  枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0,電爐或微波爐加熱至沸�  后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBSpH7.2-7.6)洗�1-2次�
  5. 滴加封閉�,室溫20分鐘。甩去多余液�, 不洗�
  6. 適當(dāng)稀釋的一抗(�IgG),37 2小時(shí)左右�4過夜�PBSpH7.2-7.6)洗2分鐘×3次。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接�(guān)系。一般來說,陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一�?jié)舛群脱娱L孵育�(shí)間;背景過高�(shí),可降低一�?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)
  7. �*化抗�IgG, 37 30分鐘�PBSpH7.2-7.6)洗2分鐘×3次�
  8. 滴加試劑SABC, 37 30分鐘�PBSpH7.2-7.6)洗5分鐘×4次�
  9. DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾�,加試劑盒�A,B,C試劑�50ul,混勻后加至切片。室溫顯�, 顯微鏡下觀察顯色反�(yīng),時(shí)間一般在3-30分鐘之間。達(dá)到合適著色強(qiáng)度時(shí)(陽性較�(qiáng),背景較低),即可終止反�(yīng)(用蒸餾水洗滌切片)�
  10. 蘇木素輕度復(fù)染。脫�,透明,封片。顯微鏡觀察�

 

注意事項(xiàng)�

  1. 如果染色背景過高,在SABC反應(yīng)之后�DAB顯色之前,用加�0.010.02% TWEEN20PBSpH7.2-7.6)洗滌切�4次,單純PBS2次,然后DAB顯色。警告:DAB 為可疑致癌物,請采取必要的防范措施�
  2. 熱修�(fù)抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0);也可以使�PBSTBS等多種緩沖液�
  3. 脫蠟�*,容易出�(xiàn)非特異性背景染色,建議免疫組化切片脫蠟與常�(guī)H.E脫蠟分開�
  4. 如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含�(nèi)源�*含量豐富的組織切片,需要�(jìn)行封閉的特殊處理�
  5. 在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑活性可能降低,因此不得使用過期的試劑盒,不同批�(hào)間的試劑盒也不能交叉混用�

 

上海卡努生物科技有限公司作�

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