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技�(shù)中心

*G(IgG)酶�(lián)試劑盒使用方�

2014�11�26� 08:07:42人氣�187�(lái)源:上海科興商貿(mào)有限公司

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� � �上海科興商貿(mào)有限公司 需要積�0
�(guān) � �試劑�
【資料簡(jiǎn)介�

          *G(IgG)酶聯(lián)試劑盒使用方�

檢測(cè)范圍�                                                          96T

2.5μg/ml -80μg/ml

 

使用目的�

本試劑盒用于�(cè)�人血清、血漿及相關(guān)液體樣本�免疫球蛋�G(IgG)含量

�(shí)�(yàn)原理

本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中*G(IgG)水平。用純化�-IgG抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋�G(IgG)再與HRP�(biāo)記的羊抗�抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�(guò)*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�免疫球蛋�G(IgG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度�OD值),通過(guò)�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中免疫球蛋�G(IgG)濃度�

試劑盒組�

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止�

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

�(biāo)�(zhǔn)品(160μg/ml

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被�

12�×8

9

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

�(shuō)明書

1

5

顯色�A

6ml×1

11

封板�

2

6

顯色�B

6ml×1/

12

密封�

1�(gè)

�(biāo)本要�

1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20保存,但�(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢�(cè)含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根�(guò)氧化物酶的(HRP)活性�

操作步驟

  1. �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中�(jìn)行稀釋�

80μg/ml

5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

40μg/ml

4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

20μg/ml

3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

10μg/ml

2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

5μg/ml

1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�

150μl2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

 

 

  1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔�待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶�(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
  2. 溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘� 
  3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
  5. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
  6. 溫育:操作同3
  7. 洗滌:操作同5
  8. 顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
  9. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
  10. �(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

操作程序總結(jié)�

 

�(jì)�

  以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)�OD值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品�OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度�OD值計(jì)算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品�OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃度�

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�

3.各步加樣均�(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�

  1. �(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量�(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)�n倍)后再�(cè)定,�(jì)算時(shí)�(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6.底物請(qǐng)避光保存�

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用�

10. 如與英文�(shuō)明書有異,以英文�(shuō)明書為準(zhǔn)�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存�2-8

2.有效期�6�(gè)�

 

上海科興商貿(mào)有限公司作�

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