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上海通蔚生物科技有限公司作�
猴（Monkey）抗谷氨酸脫羧酶抗體（GAD）ELISA 檢測試劑�
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| � � � | 上海通蔚生物科技有限公司 | 需要積� | 0 |
| � � � | |||
- 【資料簡介�
本試劑僅供研究使� 標本：血�或血�
試驗原理�
GAD試劑盒是間接法酶聯免疫吸附實驗（ELISA�.已知GAD濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先�GAD和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底�A�B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中GAD的濃度呈比例關系�
試劑盒內容及其配�
試劑盒成份（2-8℃保存）
96孔配�
48孔配�
配制
96/48人份酶標�
1塊板�96T�
半塊板（48T�
即用�
塑料膜板�
1�
半塊
即用�
標準品：40IU/ml
1瓶（0.6ml�
1瓶（0.3ml�
按說明書進行稀稀
空白對照
1瓶（1.0ml�
1瓶（0.5ml�
即用�
標準品稀釋緩沖液
1瓶（5ml�
1瓶（2.5ml�
即用�
生物素標記的�GAD抗體
1瓶（6ml�
1瓶（3.0ml�
即用�
親和鏈酶�-HRP
1瓶（10ml�
1瓶（5.0ml�
即用�
洗滌緩沖�
1瓶（20ml�
1瓶（10ml�
按說明書進行稀�
底物A
1瓶（6.0ml�
1瓶（3.0ml�
即用�
底物B
1瓶（6.0ml�
1瓶（3.0ml�
即用�
終止�
1瓶（6.0ml�
1瓶（3.0ml�
即用�
標本稀釋液
1瓶（12ml�
1瓶（6.0ml�
即用�
自備材料
1� 蒸餾��
2� 加樣器：5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�
安全�
1� 避免直接接觸終止液和底物A�B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗�
2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝��
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成��
操作注意事項
1� 試劑應按標簽說明書儲�，使用前恢復到室�。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存�
2� 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋�，密封保存，以免變質�
3� 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底�A�B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
7� 底物A應揮�，避免長時間打開蓋子。底�B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接�，有�。實驗完成后應立即讀�OD值�
8� 加入試劑的順序應一�，以保證所有反應板孔溫育的時間一��
9� 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
樣品收集、處理及保存方法
1� 血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� 細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗��1000×g離心10分鐘，取上清�
5� 保存------如果樣品不立即使�，應將其分成小部�-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
試劑的準�
1� 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲�。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
40 IU/ml
�6號標準品�
原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
20 IU/ml
�5號標準品�
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 IU/ml
�4號標準品�
100ul�5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 IU/ml
�3號標準品�
100ul�4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 IU/ml
�2號標準品�
100ul�3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.25 IU/ml
�1號標準品�
100ul�2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 IU/ml
（空白對照）
原始濃度不用稀釋直接加�50ul�
2� 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾�50倍稀��
操作步驟
1� 使用�，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡�，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差�
2� 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復�。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反應孔內�
3� 加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔�。立即加�50ul的生物素標記的抗�。蓋上膜�，輕輕振蕩混��37℃溫�1小時�
4� 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振�30�，甩去洗滌液，用吸水紙拍�。重復此操作3次。如果用洗板機洗�，洗滌次數增加一��
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混��37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振�30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗�，洗滌次數增加一��
7� 每孔加入底物A�B�50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫�10分鐘。避免光��
8� 取出酶標�，迅速加�50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD��
建議使用的實驗方�
標準品濃度（IU/ml�
A
40
40
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
B
20
20
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
C
10
10
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
D
5.0
5.0
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
E
2.5
2.5
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
F
1.25
1.25
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
G
0
0
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
H
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
局�
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果�
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線�。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性：不與其它細胞因子反應�
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%�
� � � � � � �
1�儀器值：于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光�OD值為縱坐標（Y�，相應的GAD標準品濃度為橫坐標（X�，做得相應的曲線，樣品的GAD含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�
3�檢測值范圍：0-40IU/ml
4�敏感度： 0.1 IU/ml
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