猴（Monkey）免疫球蛋白IgG ELISA 檢測試劑��

【資料簡介��

本試劑僅供研究使��  標本：血��或血��

試驗原理��

IgG試劑盒是間接法酶��(lián)免疫吸附實驗��ELISA��.已知IgG濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先��IgG和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再��(jīng)過溫育和洗滌，去除未��(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底��A��B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IgG的濃度呈比例��(guān)系��

試劑盒內(nèi)容及其配��

試劑盒成份（2-8℃保存）	96孔配��	48孔配��	配制
96/48人份酶標��	1塊板��96T��	半塊板（48T��	即用��
塑料膜板��	1��	半塊	即用��
標準品：80g/L	1瓶（0.6ml��	1瓶（0.3ml��	按說明書進行稀稀
空白對照	1瓶（1.0ml��	1瓶（0.5ml��	即用��
標準品稀釋緩沖液	1瓶（5ml��	1瓶（2.5ml��	即用��
生物素標記的��IgG抗體	1瓶（6ml��	1瓶（3.0ml��	即用��
親和鏈酶��-HRP	1瓶（10ml��	1瓶（5.0ml��	即用��
洗滌緩沖��	1瓶（20ml��	1瓶（10ml��	按說明書進行稀��
底物A	1瓶（6.0ml��	1瓶（3.0ml��	即用��
底物B	1瓶（6.0ml��	1瓶（3.0ml��	即用��
終止��	1瓶（6.0ml��	1瓶（3.0ml��	即用��
標本稀釋液	1瓶（12ml��	1瓶（6.0ml��	即用��

自備材料

1�� 蒸餾水��

2�� 加樣器：5ul��10ul��50ul��100ul��200��500ul��1000ul��

3�� 振蕩器及磁力攪拌器等��

安全��

1�� 避免直接接觸終止液和底物A��B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗��

2�� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品��

3�� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份��

操作注意事項

1�� 試劑��(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品��(yīng)丟棄，不可保存��

2�� 實驗中不用的板條��(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)��

3�� 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保��(zhì)前使用��

4�� 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底��A��B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器��

5�� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品��

6�� 洗滌酶標板時��(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反��(yīng)孔中吸水��

7�� 底物A��(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底��B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后��(yīng)立即讀��OD值��

8�� 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反��(yīng)板孔溫育的時間一樣��

9�� 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作��

樣品收集、處理及保存方法

1�� 血��-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和��(nèi)毒素的試管。收集血液后��1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離��

2�� 血��-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測��1000×g離心30分鐘去除顆粒��

3�� 細胞上清��---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物��

4�� 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎��1000×g離心10分鐘，取上清��

5�� 保存------如果樣品不立即使用，��(yīng)將其分成小部��-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍��

試劑的準��

1�� 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行��

80 g/L	��6號標準品��	原倍濃度不用稀釋直接加��50ul��
40 g/L	��5號標準品��	100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 g/L	��4號標準品��	100ul��5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 g/L	��3號標準品��	100ul��4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 g/L	��2號標準品��	100ul��3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 g/L	��1號標準品��	100ul��2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 g/L	（空白對照）	原始濃度不用稀釋直接加��50ul��

2�� 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾��50倍稀釋��

操作步驟

1�� 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體��(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，��(chǎn)生加樣上的誤差��

2�� 根據(jù)待測樣品��(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根��(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1��1稀釋后加入50ul于反��(yīng)孔內(nèi)��

3�� 加入稀釋好后的標準��50ul于反��(yīng)孔、加入待測樣��50ul于反��(yīng)孔內(nèi)。立即加��50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻��37℃溫��1小時��

4�� 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振��30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重��(fù)此操��3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次��

5�� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫��30分鐘��

6�� 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振��30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重��(fù)此操��3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次��

7�� 每孔加入底物A��B��50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫��10分鐘。避免光照��

8�� 取出酶標板，迅速加��50ul終止液，加入終止液后��(yīng)立即測定��(jié)果��

9�� ��450nm波長處測定各孔的OD值��

建議使用的實驗方��

標準品濃度（g/L��

A

80

80

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

B

40

40

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

C

20

20

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

D

10

10

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

E

5.0

5.0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

F

2.5

2.5

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

G

0

0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

H

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

局��

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根��(jù)此標準曲線無法得到的��(jié)果��

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與��(yù)期濃度相��(guān)系數(shù)R值為0.990��

2. 特異性：不與人其它細胞因子反��(yīng)��

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系��(shù)均小��10%��

��(jié) �� �� �� �� �� ��

1��儀器值：于波��450nm的酶標儀上讀取各孔的OD��

2、以吸光��OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)��IgG標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品��IgG含量可根��(jù)��OD值由標準曲線換算出濃度��

3��檢測值范圍：0-80g/L

4��敏感度： 0.1 g/L