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技術中�

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用

2016�02�01� 09:31:59人氣�171來源�上海酶聯生物研究所

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� � �上海酶聯生物研究所 需要積�0
� � �雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用
【資料簡介�

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用試驗原理�
cTn-I試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知cTn-I濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將cTn-I�*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中cTn-I的濃度呈比例關系�
試劑盒內容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存)    96孔配�    48孔配�    配制
96/48人份酶標�    1塊板�96T�    半塊板(48T�    即用�
塑料膜板�    1�    半塊    即用�
標準品:80ng/ml    1瓶(0.6ml�    1瓶(0.3ml�    按說明書進行稀稀
空白對照    1瓶(1.0ml�    1瓶(0.5ml�    即用�
標準品稀釋緩沖液    1瓶(4.0ml�    1瓶(2.0ml�    即用�
*標記的抗cTn-I抗體    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
親和鏈酶�-HRP    1瓶(8.0ml�    1瓶(4.0ml�    即用�
洗滌緩沖�    1瓶(20ml�    1瓶(10ml�    按說明書進行稀�
底物A    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
底物B    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
終止�    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
標本稀釋液    1瓶(12ml�    1瓶(6.0ml�    即用�
自備材料
1.蒸餾水�
2.加樣器�5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
3.振蕩器及磁力攪拌器等�

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用安全�
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
雞心肌肌鈣蛋�-I (cTn-I) ELISA 檢測試劑盒操作注意事�
1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存�
2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質�
3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
7.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值�
8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣�
9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
樣品收集、處理及保存方法
1、血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2、血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4、組織勻�-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
5、保�------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
試劑的準�
1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
80 ng/ml    �6號標準品�    原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
40 ng/ml    �5號標準品�    100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 ng/ml    �4號標準品�    100ul�5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 ng/ml    �3號標準品�    100ul�4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 ng/ml    �2號標準品�    100ul�3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 ng/ml    �1號標準品�    100ul�2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml    (空白對照)    原始濃度不用稀釋直接加�50ul�
2.洗滌緩沖液�50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�
操作步驟
1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差�
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反應孔內�
3.加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔內。立即加�50ul�*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
5.每孔加�60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
7.每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
8.取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果�
9.在450nm波長處測定各孔的OD值�
建議使用的實驗方�
    標準品濃度(ng/ml�    
A    80    80    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
B    40    40    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
C    20    20    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
D    10    10    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
E    5.0    5.0    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
F    2.5    2.5    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
G    0    0    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
H    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果�
雞心肌肌鈣蛋�-I (cTn-I) ELISA 檢測試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%�
雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用結果判斷與分�
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的cTn-I標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的cTn-I含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�
3、檢測值范圍:0-80ng/ml
4、敏感度� 0.1 ng/ml 

上海酶聯生物研究所作�

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