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技術中�

� 游離血紅蛋白(FHb)ELISA 檢測試劑盒說明書

2010�10�25� 01:14:26人氣�395來源�上海通蔚生物科技有限公司

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� � �上海通蔚生物科技有限公司 需要積�0
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【資料簡介�

 人(Human� 游離血紅蛋白(FHb)ELISA 檢測試劑�
本試劑僅供研究使�  標本:血清或血�

試驗原理�
FHb試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知FHb濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將FHb和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中FHb的濃度呈比例關系�

試劑盒內容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� 1� 半塊 即用�
標準品:400mg/L 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml� 1瓶(2.5ml� 即用�
生物素標記的抗FHb抗體 1瓶(6ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 1瓶(10ml� 1瓶(5.0ml� 即用�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說明書進行稀�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

自備材料
1� 蒸餾水�
2� 加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�
1� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�

操作注意事項
1� 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存�
2� 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質�
3� 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
7� 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值�
8� 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣�
9� 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�

樣品收集、處理及保存方法
1� 血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� 細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準�
1� 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
400 mg/L �6號標準品� 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
200 mg/L �5號標準品� 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 mg/L �4號標準品� 100ul�5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 mg/L �3號標準品� 100ul�4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 mg/L �2號標準品� 100ul�3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 mg/L �1號標準品� 100ul�2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 mg/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

2� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�

操作步驟
1� 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差�
2� 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔�
3� 加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔內。立即加�50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
4� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
8� 取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD值�

建議使用的實驗方�
 標準品濃度(mg/L� 
A 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 12.5 12.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果�

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%�

� � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的FHb標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的FHb含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�

3、檢測值范圍:0-400mg/L

4、敏感度� 1.0 mg/L
 

上海通蔚生物科技有限公司作�

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