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技術中�

穿山甲雌二醇(E2)酶聯免疫分析僅供研究使�

2016�07�29� 08:22:48人氣�121來源�上海酶聯生物研究所

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� � �上海酶聯生物研究所 需要積�0
� � �穿山甲雌二醇(E2)酶聯免疫分�
【資料簡介�

使用目的�
本試劑盒用于測定穿山甲血�、血漿及相關液體樣本中雌二醇(E2)含量�
穿山甲雌二醇(E2)酶聯免疫分析實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中穿山甲雌二�(E2)水平。用純化的穿山甲雌二�(E2)抗體包被微孔�,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入雌二�(E2),再與HRP標記的雌二醇(E2)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇(E2)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中穿山甲雌二�(E2)濃度� 
試劑盒組� 
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1�    7    終止�    6ml×1�
2    酶標試劑    6ml×1�    8    標準品(320 pmol/L�    0.5ml×1�
3    酶標包被�    12�×8�    9    標準品稀釋液    1.5ml×1�
4    樣品稀釋液    6ml×1�    10    說明�    1�
5    顯色劑A�    6ml×1�    11    封板�    2�  
6    顯色劑B�    6ml×1/�    12    密封�    1�
標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
穿山甲雌二醇(E2)酶聯免疫分析操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一�,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀��
160 pmol/L    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
80 pmol/L    4號標準品    150μl�5號標準品加入150μl標準品稀釋液
40 pmol/L    3號標準品    150μl�4號標準品加入150μl標準品稀釋液
20 pmol/L    2號標準品    150μl�3號標準品加入150μl標準品稀釋液
10 pmol/L    1號標準品    150μl�2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混��
3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩干,每孔加滿洗滌�,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍干�
6.加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外� 
7.溫育:操作同3�
8.洗滌:操作同5�
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
10.終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色��
11.測定:以空白空調��450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�
操作程序總結�
計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐�,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃�;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度� 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助�,洗滌時不影響結��
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤�。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多�*使用排槍加樣�
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�
6.底物請避光保存�
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
8.所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
穿山甲雌二醇(E2)酶聯免疫分析保存條件及有效期
1.試劑盒保存��2-8��
2.有效期�6個月

 

上海酶聯生物研究所作�

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