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原代細胞培養的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8、培養：置于37℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠浦肯野細胞

商品屬性：

大鼠浦肯野分離自小腦皮質組織；小腦的表面被覆著一層灰質，叫小腦皮質，小腦皮質分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質里含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經元。浦肯野細胞發出的軸突組成小腦皮質的傳出纖維，終止于小腦白質內的神經核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從小腦皮質發出的能夠傳出沖動的神經元。人的小腦皮質約有1500萬個浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導性強，傳導速度快，可達4000mm/s。屬快反應自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結P細胞。這類細胞常常平行排列，細胞內電阻低，只有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質中的神經元，細胞體呈梨形，頂端發出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構成廣泛的突觸聯系，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與主樹突相對方向）發出，細長，離開胞體不遠便形成有髓神經纖維，向內經顆粒層離開皮質進入白質，組成小腦皮質的傳出纖維，終止于小腦內部的神經核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大，約與小腦深部核團的35個神經元形成突觸。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束，小束外包繞著基底膜。細胞內含肌原纖維很少，胞漿區內充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網，細胞內電阻低，只有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內無橫管系統，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結構廣泛而復雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構成浦肯野細胞傳導快的形態學基礎。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠浦肯野經Neph3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠浦肯野采用消化法結合神經元專用培養基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含脂質濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點，也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產品：

豬藍耳病抗體(PRRS-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T

Human basic fibroblast growth factor 6 (bFGF-6) ELISA Kit 人堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒

Porcineoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISAKit 豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAMA(MouseAi-myocardialaibody)ELISAKit小鼠抗心肌抗體規格：48T/96T

血液過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性化學發光法定量檢測試劑盒20次

Porcineacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit豬乙酰受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規格：96T/48T

豬基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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豬氧化酶（XOD）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(CTnⅠ)ELISA試劑盒 ，英文名： CTnⅠ ELISA Kit

Rabbit substance P (SP) ELISA Kit 兔p物質(SP)ELISA試劑盒

牛免疫缺陷病毒(BIV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit小鼠絲/蘇蛋酸酶規格：48T/96T

體液甘油-3-0酸脫氫酶(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKit5-LO/LOX人5脂加氧酶規格：48T/96T

HA重組甲型流感 H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) Hemagglutinin 蛋白 (HA Subunit) (His 標簽) Protein

PAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2 0.2mgPAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2) 脂蛋脂酶A2抗原

CRTAM重組人 CRTAM 蛋白 (His 標簽) Protein

APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 38 / Beta-APP38 蛋白 (aa 672-709, His & GST 標簽)

AGRP Protein Human 重組人 AgRP 蛋白 (Fc 標簽)

大鼠浦肯野細胞PAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2 0.2mgPAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2) 脂蛋脂酶A2抗原

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