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上海莼試生物技術有限公司
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上海市
更新時間：2024-09-30 10:03:05瀏覽次數：74
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原代細胞培養的具體步驟：
1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。
3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。
7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。
8、培養：置于37℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。
商品屬性：
組織來源 | 前列腺 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
產品貨號 | CS-X3552 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介：
大鼠前列腺微血管內皮分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性性腺器官；前列腺是不成對的實質性器宮，由腺組織和肌組織構成。前列腺如栗子，底朝上，與膀胱相貼，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯合，后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口，所以，前列腺有問題時，排尿首先受影響。前列腺是機體非常少有的，具有內、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是構成精液主要成分；作為內分泌腺，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。微血管是極細微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質交換。其管壁主要由一層內皮細胞構成，在內皮外面有一薄層結締組織。另外還常可見到一種扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細胞。每一次性活動都會造成前列腺的充血,促使微血管不斷擴張而壓迫腺體造成淤積，體外培養前列腺微血管內皮，對于研究前列腺炎癥，炎癥發生機理有重要的意義。
方法簡介：
實驗室分離的大鼠前列腺微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質量檢測：
實驗室分離的大鼠前列腺微血管內皮采用膠原酶 - 蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法，最后通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養信息：
培養基：基礎培養基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：內皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代；不建議多次傳代
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞VS細胞系：
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。
原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點，也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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